QB 2525—2001 食品添加剂葡萄糖转苷酶

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QB 2525—2001.

f)5%苯酚溶液:将苯酚(CH,OH) 5g于60℃溶于50 mL水，将溶液冷却至室温，用水稀释至100 mL;

g)4-氨基安替比林-苯酚显色剂:在 Tris-磷酸缓冲液（pH7.2）40 mL中，加入葡萄糖氧化酶(5 mg 葡萄糖氧化酶“Amano”2)550单位和过氧化物酶（0.76 mg，16$ U/mg的过氧化物酶“Amano”2) 125单位，再加入0.4%4-氨基安替比林溶液1 mL和5%苯酚溶液1.4 mL，用Tris-磷酸缓冲液（pH7.2)稀释至50 mL(随配随用);

h)底物溶液:将α-甲基葡萄糖(CH,0;)2.0g溶解于水50 mL中，用水稀释至100mL<5℃~15℃可稳定二星期)。

4.1.3测定方法

`4.1.3.1 样品溶液的制备

用酶制剂配制酶溶液使其0.5 mL的Ao-A介于0.15和0.32之间:吸取酶制剂1 mL,加到一个适当大小的容量瓶中，用经冷却的水稀释至刻度，混匀。

示例:α-葡萄糖转苷酶L“Amano":[n-300〕稀释1 mL--300 mL。

4.1.3.2测定

吸取底物溶液（4.1.2h）1mL和0.02 molL乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.0)(4.1.2c)1mL`加入试管(15 mm× 150 mm)内，在（40±0.5）℃的恒温水浴箱中保温10 min。加入样品稀释酶液（4.1.3.1）0. 5 mL，混匀，于（40士0.5)℃的恒温水浴箱中准确保温60 min后，将试管转移至沸水浴中加热 5 min，然后用流水快速冷却。冷却后，吸此溶液0.1 mL到试管中，并加入4-氨基安替比林-苯酚显色剂(4.1.2g) 3 mL,混匀.将此试管放入（40土0.5)℃的恒温水浴中，保温20 min，测定500 nm处的吸光度Aso。

空白对照:吸0.02 molL乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.0)(4.1.2c） 1 mL和样品稀释酶液(4.1.3.1)0.5mL加入试管(15mm× 150mm)内，混匀。将试管转移至沸水浴中加热5min,然后用流水快速冷却。冷却后，加入底物溶液（4.1.2h) 1 mL，混匀。吸此溶液0.1 mL至空试管（15 mm× 150 mm)内，加入4-氨基安替比林-苯酚显色剂（4.1.2 g) 3 mL，混匀。将此试管放入《40士0.5）℃的恒温水浴中，保温20min，测定500nm处的吸光度A。

精确称取105℃下干燥6h的葡萄糖(CH,0) 1.000g，溶于100mL水中，分别取1mL,2mL，3mL，4mL，5mL，用水定容至100mL(每1mL该溶液分别含有100 pg , 200 ug,300 ug . 400 ug和500 ug的葡萄糖)。

分别吸取以上葡萄糖标准液0.1 mL和4-氨基安替比林-苯酚显色剂(4.1.2g) 3 mL,加入试管（15 mm×150 mm）内，混匀。将这些试管放入（40士0.5）℃的馆温水浴箱中，保温20mnin，测定波长500 nm处的吸光度AsosAs2o，As3AssoAsso。

·标准液的空白对照:用水来替代葡萄糖标准液，按上述方法测定空白对照液吸光度Aso。

4.1.4 分析结果的表述

在此试验条件下，在反应混合物2.5 mL 中，60min产生1 ug葡萄糖所需的酶量定义为一-个α-葡萄糖转苷酶活力单位。

(QB 2525—2001 食品添加剂葡萄糖转苷酶标准内容仅部分展示)

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